Как предупредить лихорадку чикунгунья

Целью работы было выделение арбовирусов из комаров различных видов в культуре клеток и их идентификация молекулярными и иммунохимическими методами.

Материалы и методы. Выделение вирусов проводилось на клетках C6/36. Возбудителей идентифицировали с использованием наборов для иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антигенов вирусов денге, Чикунгунья, ВЗН и Синдбис и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) со специфическими праймерами с последующим секвенированием по Сенгеру.

Результаты. Всего было исследовано 102 комара, относящихся к трем родам: Culex spp., Culiseta spp., Aedes spp. Комары каждого вида или рода были разделены на пулы по 4–5 особей. При исследовании суспензий только 2 пулов комаров, полученных от Aedes aegypti и Aedes albopictus, начиная с 3-го пассажа отмечены изменения монослоя клеток C6/36. В материалах суспензии, полученной из пула Aedes albopictus, начиная с 4-го пассажа методом ИФА выявлялся антиген вируса Чикунгунья. В материалах, полученных из пула Aedes aegypti, на 5-м пассаже определялся вирус денге. Таким образом, только в 2 из 23 исследованных пулов комаров разных родов определялись антигены вирусов Чикунгунья или денге. Материалы 5-го пассажа были исследованы в ОТ-ПЦР со специфическими праймерами к вирусам денге и Чикунгунья. Подтверждено, что изолят, полученный от комаров Aedes albopictus, содержал РНК вируса Чикунгунья и соответствовал Восточному/Центральному/Южно-Африканскому генотипу, а изолят, полученный от комаров Aedes aegypti, содержал РНК вируса денге 2-го типа.

Заключение. Полученные нуклеотидные последовательности вируса Чикунгунья были депонированы в международной базе данных GenBank под номерами MN271691 и MN271692.

Ключевые слова

Введение

Комары различных родов являются перено­счиками целого ряда возбудителей вирусных забо­леваний, прежде всего относящихся к семействам Flaviviridae (род Flavivirus) и Togaviridae (род Alfavirus) [1, 2]. Ареал распространения комаров родов Aedes spp., Culex spp., Culiseta spp. не огра­ничивается странами, расположенными в тропиче­ской и субтропической зонах. Комары этих видов распространены в странах с умеренным климатом в Южном и Северном полушариях [2-4]. В связи с этим возрастает вероятность смены переносчика, что, в свою очередь, может приводить к изменениям инфекционности вирусов для человека [5].

Для вируса Чикунгунья описаны три геноти­па: Восточный/Центральный/Южно-Африканский, Западно-Африканский и Азиатский [6]. Увеличение выявляемости вируса Чикунгунья в отловленных комарах и у заболевших людей привело к более подробному изучению нуклеотидных последова­тельностей его изолятов, из-за чего изменилось представление о генотипах данного патогена. В частности, некоторыми исследователями предла­гаются генотипы линии Индийского океана и ка­рибский [6-8]. Для вируса денге описаны только 4 серотипа [5, 9]. Учитывая растущую выявляемость вирусов, переносимых комарами, и их патогенность для человека, разработка средств профилактики и лечения заболеваний, вызываемых альфа- и флави- вирусами, остается актуальной. Выделение вирусов непосредственно от переносчиков, отловленных в естественных ареалах обитания, и изучение выде­ленных штаммов являются составной частью этого процесса.

Целью данной работы были выделение и идентификация арбовирусов, принадлежащих ро­дам Flavivirus и Alfavirus, из комаров видов Aedes albopictus, Aedes aegypti, Culiseta spp., Culex spp.

Материалы и методы

Комары были отловлены в сухой сезон в лесной зоне в Никарагуа (муниципалитет Типитапа) с ко­ординатами 12.325527N 85.974662W и 12.323326N 85.974275W. Среди отловленных комаров были представители родов Aedes (виды Aedes albopictus, Aedes aegypti), Culiseta spp. и Culex spp. После опре­деления видов комары были разделены на пулы по 4-5 особей одного вида. Каждый пул был гомоге­низирован до получения суспензии в объеме 0,4 мл фосфатно-солевого буфера рН 7,4.

Выделение вируса. Полученную суспензию комаров наносили на монослой комариных клеток линии С6/36, выращенный в культуральных флако­нах («Coming», США) площадью 25 см 2 . После 1 ч адсорбции во флаконы добавляли среду поддержки DMEM (ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова» РАН) с 2% фетальной эмбриональной сывороткой («Gibco»). Флаконы находились в термостате при 32°С с 5% содержанием СО2. Наблюдение за мо­нослоем проводили ежедневно под микроскопом до появления цитопатического действия.

Определение антигенов вирусов. Для опре­деления антигенов вирусов Чикунгунья, Денге, Синдбис и вируса Западного Нила в образцах куль­туральной жидкости использовали наборы реаген­тов компании «Биосервис»: «БиоСкрин-Денге» (комплект AG), «БиоСкрин-Чикунгунья» (комплект AG), «БиоСкрин-ВЗН» (комплект AG), «БиоСкринСиндбис» (комплект AG). Постановку реакции и учет результатов проводили согласно инструкции к наборам реагентов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Из 100 мкл вируссодержащей культуральной жидко­сти с помощью комплекта реагентов «АмплиСенс® Магно-Сорб» («ИнтерЛабСервис») выделяли РНК согласно инструкции производителя.

Далее с использованием обратных праймеров для вируса Чикунгунья: pE2CHVrev1, pE2CHVrev2. pElCHVrevl, pE1CHVrev2, pNSlCHVrevl, pNS1 CH-Vrev2, pNS1CHVrev3 (табл. 1); для вируса денге — pDV2rt (5’-CAGCCATGGCAGCGGTAGGTC-3’) и набора реагентов для обратной транскрипции (ОТ) («Синтол») на матрице вирусной РНК проводили реакцию ОТ и получали кДНК. На первом этапе смешивали 2 мкл обратного праймера (10 пкмоль/ мкл) с 6 мкл выделенной РНК и прогревали смесь при 95°С 5 мин. После этого пробирки охлажда­ли при комнатной температуре 2 мин, добавляли в них 22 мкл смеси для ОТ (9 мкл деионизированной воды, 12 мкл 2,5-кратного буфера для ОТ, 2,5 мкл MMLV-ревертазы) и инкубировали при 42°С 30 мин. Для инактивации ревертазы смесь прогревали в те­чение 5 мин при 95°С.

Для получения фрагментов генов El, Е2 и NS1 вируса Чикунгунья и их секвенирования использо­вали олигонуклеотиды, описанные в табл. 1.

Таблица 1. Праймеры, использованные для ОТ, ПЦР и секвенирования вируса Чикунгунья

Table 1. Primers used for RT, PCR and sequencing of the Chikungunya virus

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека сообщает о распространении лихорадки чикунгунья в странах, которые россияне предпочитают для отдыха.

По данным Роспотребнадзора, в России уже зарегистрированы завозные случаи заболевания, переносимого инфицированными комарами. Сейчас лихорадка Чикугунья распространяется в странах Западного полушария. Первая волна инфицирования вирусом чикунгунья коснулась островных государств Карибского бассейна, а далее переместилась в Доминиканскую Республику, Колумбию и Венесуэлу.

В Перу в связи с лихорадкой на девяноста дней объявлено чрезвычайное санитарное положение. В стране пока не установлено ни одного случая заражения, а меры приняты целью недопущения заноса вируса из соседних стран.

В настоящее время, по данным Всемирной организации здравоохранения, лихорадка чикунгунья выявлена почти в 40 странах Азии, Африки, Европы и Америки, наиболее распространена в Индии, на островах Индийского океана, Юго-Восточной Азии, Центральной и Южной Америке.

Роспотребнадзор советует россиянам, выезжающим в соответствующие страны принимать меры предосторожности против укусов насекомых: носить защитную одежду и использовать специальные репелленты.

Лихорадка чикунгунья переносится комарами. Вскоре после укуса у человека появляется температура до 40 градусов, кожная сыпь, боль и ломота в мышцах, усталость, головная боль. Обычно симптомы болезни появляются через 4-8 дней после укуса человека инфицированным комаром, но этот период может составлять от 2 до 12 дней. Каких-либо специальных противовирусных препаратов для лечения лихорадки чикунгунья нет. Лечение направлено, главным образом, на облегчение симптомов, включая боль в суставах, с помощью жаропонижающих средств, оптимальных болеутоляющих препаратов и жидкости.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзор) предупредила россиян, выезжающих за рубеж, о распространении лихорадки чикунгунья, сообщает «Федеральное агентство новостей».

Заболевание выявлено почти в 40 странах Азии, Африки, Европы и Америки. В частности, лихорадка широко распространена в Индии и на островах Индийского океана, а также в Юго-Восточной Азии, Центральной и Южной Америке.

В связи с этим Роспотребнадзор просит принимать меры предосторожности против укусов насекомых. Как и в случае с лихорадками денге и Зика, переносчиками чикунгуньи являются комары Aedes aegypti.

  • О компании
  • Редакция
  • Пресс-центр
  • Реклама
  • Новости о нас
  • Пользовательское
    соглашение
  • Охрана труда

Авторское право на систему визуализации содержимого портала iz.ru, а также на исходные данные, включая тексты, фотографии, аудио- и видеоматериалы, графические изображения, иные произведения и товарные знаки принадлежит ООО «МИЦ «Известия». Указанная информация охраняется в соответствии с законодательством РФ и международными соглашениями.

Частичное цитирование возможно только при условии гиперссылки на iz.ru.

АО «АБ «РОССИЯ» — партнер рубрики «Экономика»

Сайт функционирует поддержке Федерального агентства коммуникациям.

Ответственность за содержание любых рекламных материалов, размещенных на портале, несет рекламодатель.

Новости, аналитика, прогнозы и другие материалы, представленные на данном сайте, не являются офертой или рекомендацией к покупке или продаже каких-либо активов.

Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций. Свидетельства о регистрации ЭЛ № ФС 77 — 76208 от 8 июля 2019 года, ЭЛ № ФС 77 — 72003 от 26 декабря 2019 года